T4 多聚核苷酸激酶試劑能夠催化ATP的 γ-位磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到寡核苷酸鏈（雙鏈或單鏈DNA或RNA）的 5’-羥基末端以及3’

-單磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶還具有3’磷酸酶活性，將3’-磷酸基團(tuán)從寡核苷酸的3’磷酸末端、脫氧3’-單磷酸核苷和

脫氧3’-二磷酸核苷上水解掉。該酶經(jīng)修飾后，其3’磷酸酶活性缺失，但仍保留了所有激酶的活性。

組分

組分名稱數(shù)量

T4 Polynucleotide Kinase (10 U/μl)100 μl

10×T4 PNK Buffer0.5 ml

10mM ATP100 μl

應(yīng)用

DNA 或 RNA 5′ 末端的磷酸化，以便進(jìn)行連接反應(yīng)。

DNA 或 RNA 的末端標(biāo)記，用作探針和進(jìn)行 DNA 測序

將 3′ 端已經(jīng)磷酸化的單核苷酸 5′ 磷酸化，制備pNp 底物，用于添加到 DNA 或 RNA的 3′ 端

對 3′ 端有磷酸基團(tuán)的寡核苷酸的 5′ 端進(jìn)行標(biāo)記

活性定義

1 單位指 37℃條件下，30 分鐘內(nèi)催化1nmol 酸不溶性[32P] 摻入所需要的酶量。

儲存

-20℃可保存2年。

T4 多聚核苷酸激酶試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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